培養(yǎng)細(xì)胞的具體常規(guī)觀察

培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)觀察

細(xì)胞接種或傳代以后，實(shí)驗(yàn)者每天或至多間隔1～2d，要對細(xì)胞做常規(guī)性檢查。觀察細(xì)胞形態(tài)和生長情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無污染等。根據(jù)細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化，做換液或傳代處理，如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時(shí)采取措施。   

1. 細(xì)胞形態(tài) 生長狀態(tài)良好的細(xì)胞，在一般顯微鏡下觀察時(shí)可見，細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓不清。細(xì)胞生長不良時(shí)，輪廓增強(qiáng)，胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物，細(xì)胞之間空隙加大，細(xì)胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點(diǎn)，如上皮細(xì)胞變成類上皮細(xì)胞等。某些染料當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí)能透過變性的胞膜與解體的細(xì)胞核DNA結(jié)合，而令其著色。因而常用臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue) 鑒別細(xì)胞死活，活細(xì)胞不著色，死細(xì)胞核呈藍(lán)色。

2. 細(xì)胞生長 初代培養(yǎng)或傳代的細(xì)胞懸液接種以后，經(jīng)過長短不同的潛伏期后開始增殖。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見細(xì)胞生長，一周內(nèi)便可連接成片。接種細(xì)胞長滿瓶壁后，應(yīng)及時(shí)做再培養(yǎng)。否則由于營養(yǎng)物消耗和代謝積累，細(xì)胞即進(jìn)入停止期或退化期。此時(shí)細(xì)胞輪廓增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)常出現(xiàn)顆粒狀堆積物，為膨脹的線粒體，細(xì)胞質(zhì)呈空泡化，細(xì)胞變圓、粗糙，嚴(yán)重時(shí)細(xì)胞從瓶壁脫落，只有及時(shí)再做傳代處理，才能使細(xì)胞繼續(xù)生長繁殖。

3. 營養(yǎng)液 正常情況下，培養(yǎng)液呈桃紅色。如果細(xì)胞維持在pH6.5～6.6條件下，細(xì)胞會(huì)脫落死亡。當(dāng)培養(yǎng)液酸化變黃時(shí)，說明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量，需要更換新鮮培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中如加Hepes或用5％CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持相對穩(wěn)定。更換營養(yǎng)液的時(shí)間，可依營養(yǎng)物的消耗而定，細(xì)胞生長旺盛時(shí)2～3d換一次，生長緩慢時(shí)，3～4d亦可。要特別注意各種細(xì)胞對pH值要求是不一樣的。

4. 微    生物    污染 微    生物    污染培養(yǎng)    細(xì)胞培養(yǎng) 物后會(huì)出現(xiàn)pH值改變，培養(yǎng)液呈現(xiàn)混濁狀。細(xì)菌感染后，由于細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)，光鏡觀察可見有微閃光；真菌感染則在鏡下見許多細(xì)絲狀菌絲，有時(shí)還密集有群集孢子；支原體的污染需要借助一些檢測手段才可檢出。細(xì)胞污染以后一般應(yīng)當(dāng)廢棄，對于重要的細(xì)胞株，可以參考相關(guān)專著，介紹采取一些措施清除污染。比較重要的實(shí)驗(yàn)、珍貴的細(xì)胞，至少由兩個(gè)實(shí)驗(yàn)人員獨(dú)立培養(yǎng)操作，或由一個(gè)人分次(不同時(shí))操作。除培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生條件外，空氣中的濕度與微生物污染關(guān)系密切。重要的、周期長的實(shí)驗(yàn)盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進(jìn)行。