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產(chǎn)品分類(lèi)
aZP Elisa Kit 
aZP Elisa Kit
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英文名稱(chēng) : Mouse anti-zona pellucida antibody, aZP Elisa Kit
貨號(hào) : EY-00M1211
規(guī)格 : 96T/48T
品牌 : 上海一研
價(jià)格 :
0.00
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aZP Elisa Kit用途:
本試劑盒僅供科研使用,定量檢測(cè)細(xì)胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biāo)本中aZP的含量。

原理:

采用雙抗體夾心法測(cè)定aZP水平。用純化的aZP抗體包被微孔板,制成固相載

體,實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,并加入 HRP 標(biāo)記的 ABP 抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,再用硫酸終止反應(yīng),轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD 值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算測(cè)試樣品中 ABP 濃度。

aZP Elisa Kit試劑盒組成:

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7

終止液

6ml×1 瓶

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1瓶

8

陽(yáng)性對(duì)照

0.5ml×1 瓶

3

酶標(biāo)包被板

12 孔×8 條

9

陰性對(duì)照

0.5ml×1 瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1 瓶

10

說(shuō)明書(shū)

1 份

5

顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

11

封板膜

2 張

6

顯色劑 B 液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1 個(gè)

aZP Elisa Kit實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制:

1. 儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。

2. 緩沖液使用:加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中,如果樣品量不夠或者不確定,緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。

混勻,靜置1小時(shí)備用(如果標(biāo)本是血清或者血漿,此步驟忽略)。

3. 洗液的配制:按1:100的比例配制洗液備用。

樣品收集、處理及保存:

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

2. 細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104

-106

/ml 左右,通過(guò)反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或

者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測(cè)。

3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測(cè)。

4. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上

清。

5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

6. 組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱(chēng)取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000

rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測(cè)。

7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

8. 保存:如果樣品不能立即檢測(cè),應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)

本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解

凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

aZP Elisa Kit操作步驟:

1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。

2. 分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)

品組(6 個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。

注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。

3. 加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul

的待測(cè)樣本。

4. 加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。

5. 溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。

6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標(biāo)板 5 次,用吸水紙徹底拍干。

7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止:25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。

9. 讀板:在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值。

aZP Elisa Kit注意事項(xiàng):

1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。

2. 加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免**孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響

實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3. 孵育:嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

4. 反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn),可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商聯(lián)系,

如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

aZP Elisa Kit性能

1. 靈敏度:最小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié)果判斷與分析

1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的待測(cè)物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。


買(mǎi)家數(shù)量成交時(shí)間
正品保障

確保所有產(chǎn)品都是原裝正品

優(yōu)質(zhì)服務(wù)

優(yōu)質(zhì)服務(wù),售后無(wú)憂(yōu)

安全包裝

統(tǒng)一包裝,保障產(chǎn)品安全運(yùn)輸

正規(guī)發(fā)票

機(jī)打發(fā)票,附箱送達(dá)

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